ExoView外泌体全面表征试剂盒
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ExoView外泌体全面表征试剂盒

ExoView外泌体全面表征试剂盒


外泌体计数、粒径、蛋白表达、蛋白共定位一次完成


检测样本类型

对细胞培养上清、血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液等生物样本中的外泌体直接进行分析

捕获抗体种类

anti-CD81, anti-CD9, anti-CD63, 同型IgG对照;可自定义

单次上样体积

35 µl稀释样本

重复检测数目

3复孔

荧光抗体种类

CD9(Blue)CD81(Green)CD63(Red)


实验原理


① 35 μL外泌体样品滴加在芯片上孵育;

② 预先包被的抗体特异结合外泌体表面蛋白以捕获外泌体;

③ 再使用荧光抗体特异性标记需要表征的标记物;

④ 后用ExoView R100检测外泌体粒径、计数、蛋白表达(CD9,CD81,CD63等)及共定位。



检测流程


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产品类别


产品货号产品名称
EV-TETRA-C人外泌体检测试剂盒
EV-TETRA-P人血浆外泌体检测试剂盒
EV-TETRA-M2鼠外泌体检测试剂盒
EV-TETRA-C-CAR人外泌体内容物检测试剂盒
EV-TETRA-P-CAR人血浆外泌体内容物检测试剂盒
EV-TC-FLEX自由捕获人外泌体检测试剂盒
EV-TP-FLEX自由捕获人血浆外泌体检测试剂盒
EV-TC-FLEX-CAR自由捕获人外泌体内容物检测试剂盒
EV-TP-FLEX-CAR自由捕获人血浆外泌体内容物检测试剂盒
EV-TM-FLEX自由捕获鼠外泌体检测试剂盒
EV-TM-FLEX-CAR自由捕获鼠外泌体内容物检测试剂盒
EV-FLEX-2自由捕获外泌体检测试剂盒
EV-FLEX-2 -CAR自由捕获外泌体内容物检测试剂盒
EV-CTETRA-1/2/3人外泌体检测试剂盒+1/2/3个自定义捕获抗体
EV-CTETRA-1/2/3-CAR人外泌体内容物检测试剂盒+1/2/3个自定义捕获抗体
EV-CUST-1/2/3/4/5/6自定义1/2/3/4/5/6抗体捕获外泌体检测试剂盒
EV-CUST-1/2/3/4/5/6-CAR自定义1/2/3/4/5/6抗体捕获外泌体内容物检测试剂盒



试剂盒特点


特异性捕获

芯片上可包被多达6种捕获抗体,特异性捕获含特定蛋白标记物的外泌体。


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阳性外泌体计数

芯片捕获外泌体后,可通过SP-IRIS技术直接检测样品中外泌体的数量。



单个外泌体蛋白共定位分析

检测每个外泌体的荧光信号并进行统计,可获得荧光共定位信息,用于分析样品中不同表型外泌体的比例(如右图所示)



无需纯化

使用抗体捕获模式,防止样品中杂质影响结果,可直接检测血液、尿液和细胞培养液中的外泌体,未纯化样品的测量结果与纯化后基本一致(如右图所示)



粒径分辨率高

高精度SP-IRIS技术,可检测≥50 nm的外泌体,测量结果与电子显微镜检测结果基本一致,并统计生成外泌体的粒径分布结果(如右图所示)



可检测外泌体内容物

试剂盒配套相应的穿膜剂,可穿透外泌体并对外泌体内容物进行染色并检测,未穿膜时只能检测到跨膜蛋白CD9的荧光信号,穿膜后即可检测到外泌体内容物Syntenin的表达(如右图所示)






Cell:对不同体液中小RNA测序以筛选佳的胞外RNA提取方法

 

exRNA profile会受到不同来源(细胞/组织),不同状态(年龄/健康程度/器官状态)的影响,且由包括外泌体在内的不同的载体运输,加上不同的提取方法和检测技术,均会影响exRNA profile的测定结果。现今的小RNA测序方法已经可以准确地表征exRNA profile,因此合适的exRNA提取方法便关重要。Srinivasan[1]等通过使用多种exRNA分离方法分离不同位点获得的5种体液中的外泌体,分析结果后总结出了不同体液的适合分离方法。

其中,研究人员使用单个外泌体表型分析技术(Exoview)检测了来源于人血浆的外泌体的蛋白marker表达,判断出血浆外泌体根据蛋白marker主要分为CD63-/CD81+/CD9+和CD63+/CD81+/CD9+两种。

人血浆外泌体蛋白表达分析


参考文献:[1] Srinivasan, S., Yeri, A., Cheah, P. S., Chung, A., Danielson, K., De Hoff, P., ... & Laurent, L. C. (2019). Small RNA sequencing across diverse biofluids identifies optimal methods for exRNA isolation. Cell, 177(2), 446-462.




Brain Behavior and Immunity:脊髓损伤导致血清神经炎症相关纳米颗粒中miRNA与CD81+外泌体水平的改变


脊髓损伤(SCI)会对机体产生系统性影响,导致呼吸、免疫、消化等功能异常,以及相关脑区产生神经炎症和退行性病变。有研究表明,SCI的病理与系统性影响可能与血液来源的因子如外泌体的运输有关;而在中枢神经系统损伤模型中,外泌体可能参与了miRNA等炎性因子运输导致炎症扩散。Khan等[1]使用包括Exoview外泌体表型分析的多种技术详细表征了SCI建模的小鼠血浆外泌体,发现损伤后外泌体数量、蛋白marker和内容物均有明显的变化,将SCI小鼠的外泌体注射入脑室还可诱发产生炎症。

研究人员使用ExoView检测了SCI血浆外泌体的粒径、数量、荧光强度和共定位(图1A)。外泌体在CD81和CD9区域产生特异性结合而被捕获,而没有CD63捕获。根据干涉成像获得外泌体尺寸分布,其中在50nm多(图1B&C)。荧光成像则检测到了大量干涉成像检测不出的尺寸小于50nm的外泌体(图1D&E),CD81和CD9在大量外泌体上表型出荧光共定位,而CD63荧光则未被检测到,这与图1C结果一致(图1F-H)。相比之下,NTA与流式分析无法检测到尺寸小于50nm的外泌体。

图1 ExoView检测血浆外泌体的粒径、数量、荧光强度和共定位


研究人员进一步比较了SCI组和对照组的血浆外泌体变化,结果表明,在损伤后1d的时间点,CD81外泌体数量相对对照组更高,与Western Blot的结果一致;而CD9外泌体数量则没有统计学差异,与流式分析的结果一致(图2A&B)。基于图2HCD81CD9有大量的荧光共定位,检测CD9外泌体的CD81荧光强度,由1d的荧光强度中位数差异可知,

图2 ExoView检测血浆外泌体的粒径、数量、荧光强度和共定位


参考文献:[1] Khan, N. Z., Cao, T., He, J., Ritzel, R. M., Li, Y., Henry, R. J., ... & Wu, J. (2020). Spinal cord injury alters microRNA and CD81+ exosome levels in plasma extracellular nanoparticles with neuroinflammatory potential. Brain, behavior, and immunity.




Cells:CD44糖蛋白在胃癌发生中的作用


CD44是一种跨膜糖蛋白,能够介导细胞间与细胞-基质间相互作用,主要配体为透明质酸(HA)。研究表明,CD44与肿瘤的生长相关,其在肿瘤细胞中高表达,且CD44与HA的结合亲和力高,因此纳米载体常用HA做表面修饰以作为肿瘤细胞的靶向药物载体。外泌体是天然的靶向信息传递载体,有研究在外泌体中检测到CD44。Härkönen等[1]使用胃癌细胞MKN74研究了CD44表达对外泌体分泌,HA合成与肿瘤细胞生长的影响。结果表明,CD44促进了细胞表面和细胞间的HA形成,调控肿瘤微环境;CD44可改变外泌体的物理性质以及靶向性质。

其中,研究人员使用Exoview检测了MKN74细胞的未经纯化的培养基及分离纯化后的外泌体中的含CD44以及其他标记物的含量。结果表明,相对于对照组,MOCK(CD44敲除)细胞组在未经纯化的培养基及分离纯化后的分泌外泌体的数量显著降低。以上结果表示ExoView可以直接对复杂环境的培养基进行检测,无需分离纯化步骤,且检测结果具有特异性。

ExoView检测表达不同蛋白标记物的外泌体数量


参考文献:[1] Härkönen, K., Oikari, S., Kyykallio, H., Capra, J., Hakkola, S., Ketola, K., ... & Rilla, K. (2019). CD44s assembles hyaluronan coat on filopodia and extracellular vesicles and induces tumorigenicity of MKN74 gastric carcinoma cells. Cells, 8(3), 276.




Cancer Cell Int:外泌体与miRNA调节成神经管细胞瘤的干细胞性

 

脑瘤中部分细胞具有干细胞特性,能够自我更新并分化为不同细胞系。其中,成神经管细胞瘤的病人有25%经过传统疗法后5年内复发并转移导致死亡,存活的病人也受到化疗和放疗的副作用和并发症影响,因此需要一种安全有效的治疗方法。肿瘤细胞的外泌体含有miRNA,能够调节细胞增殖、分化、代谢、凋亡等生理过程并与抗药性相关。有研究表明肿瘤干细胞的外泌体运载了肿瘤细胞特有的miRNA,能够产生有利于肿瘤发展的微环境。Choi等[1]研究了成神经管细胞瘤的外泌体及运载的miRNA及其在肿瘤治疗中的潜在作用。其中,miR-135b和miR-13在肿瘤干细胞中高表达,抑制两者会导致具有肿瘤抑制作用的Angiomotin‑like 2(AMOTL2)表达上升,使肿瘤干细胞的干细胞特性下降。

其中,研究人员使用ExoView通过荧光成像检测肿瘤细胞与肿瘤干细胞的外泌体标记物,在两种细胞的外泌体上均检测到了Alix和Syntenin两种内蛋白,并且可以确定两种内蛋白与CD63/CD9外泌体标记物共定位。

Exoview检测外泌体上的Alix(a)与Syntenin(b)蛋白


参考文献:[1] Choi, S. A., Koh, E. J., Kim, R. N., Byun, J. W., Phi, J. H., Yang, J., ... & Kim, S. K. (2020). Extracellular vesicle-associated miR-135b and-13 regulate stemness in Group 4 medulloblastoma cells by targeting angiomotin-like 2. Cancer cell international, 20(1), 1-14.




外泌体荧光数量统计


外泌体粒径检测


外泌体内容物检测


荧光强度与粒径关系


荧光共定位分析




• Andras Saftics.(2021) Data evaluation for surface-sensitive label-free methods to obtain real-time kinetic and structural information of thin films: A practical review with related software packages. Advances in Colloid and Interface Science

• Kyoung-Won Ko.(2021) Integrated Bioactive Scaffold with Polydeoxyribonucleotide and Stem-Cell-Derived Extracellular Vesicles for Kidney Regeneration. ACS Nano

• Tanina Arab. (2021) Characterization of extracellular vesicles and synthetic nanoparticles with four orthogonal single‐particle analysis platforms. Journal of Extracellular Vesicles

• Niaz Z.Khan.(2021) Spinal cord injury alters microRNA and CD81+ exosome levels in plasma extracellular nanoparticles with neuroinflammatory potential. Brain, Behavior, and Immunity

• Dario Brambilla. (2021) EV Separation: Release of Intact Extracellular Vesicles Immunocaptured on Magnetic Particles. Analytical Chemistry

• Enkhtuya Radna. (2021) Extracellular vesicle mediated feto-maternal HMGB1 signaling induces preterm birth. Lab on a Chip

• Li, M., Soder. (2021) WJMSC‐derived small extracellular vesicle enhance T cell suppression through PD‐L1. Journal of Extracellular Vesicles

• Crescitelli, R. (2021) Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues. Nature protocols

• Berger, A. (2021). Local administration of stem cell-derived extracellular vesicles in a thermoresponsive hydrogel promotes a pro-healing effect in a rat model of colo-cutaneous post-surgical fistula. Nanoscale

• Vidal, M. (2020) Exosomes and GPI-anchored proteins: Judicious pairs for investigating biomarkers from body fluids. Advanced drug delivery reviews

• K Cho, H Kook.(2020)Study of immune-tolerized cell lines and extracellular vesicles inductive environment promoting continuous expression and secretion of HLA-G from semiallograft immune tolerance during pregnancy. Journal of Extracellular Vesicles. 

• Maximillian A. Rogers.(2020)Annexin A1–dependent tethering promotes extracellular vesicle aggregation revealed with single–extracellular vesicle analysis. Cell Biology

• Annette M. Marleau.(2020)Targeting tumor-derived exosomes using a lectin affinity hemofiltration device. Cancer Research

• Alessandro Gori.(2020)Membrane-Binding Peptides for Extracellular Vesicles On-Chip Analysis. Journal of Extracellular Vesicles

• Rossella Crescitelli.(2020)Subpopulations of extracellular vesicles from human metastatic melanoma tissue identified by quantitative proteomics after optimized isolation. Journal of Extracellular Vesicles

• Maria S. Panagopoulou.(2020) Phenotypic analysis of extracellular vesicles:  a review on the applications of fluorescence. Journal of Extracellular Vesicles.

• WeiYan.(2020) Immune Cell-Derived Exosomes in the Cancer-Immunity Cycle. Trends in Cancer

• Daniel Bachurski. (2019) Small RNA Sequencing across Diverse Biofluids Identifies Optimal Methods for exRNA Isolation. Cell.



部分国内用户



部分国外用户

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ExoView外泌体荧光检测分析系统 产品资料



纳米颗粒追踪分析(NTA)与ExoView的重要对比



ExoVoew外泌体全面表征试剂盒


优化的共定位分析




外泌体分析操作流程:仅需7步实现外泌体快速检测